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研域干貨：植物安排樣本的前處理
發(fā)布時(shí)間： 2019-10-29 點(diǎn)擊次數(shù)： 1549次一、勻漿介質(zhì)
一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶可根據(jù)樣本及測(cè)定目標(biāo)的情況自行設(shè)定濃度,意圖是堅(jiān)持樣本的等滲環(huán)境。
二、安排勻漿的制備
1、取安排塊（0.2g～0.5g）可到5～10mg在冰冷的PBS中漂洗，濾紙拭干，稱重，放入5ml的勻漿管中。
2、按重量(g):體積(ml)=1:4的比例參加4倍體積的勻漿介質(zhì)于勻漿管中，冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎安排塊。
3、勻漿的方式：手藝勻漿，機(jī)器勻漿。
① 手藝勻漿：左手持勻漿管將下端刺進(jìn)盛有冰水混合物的器皿中，右手將搗桿垂直刺進(jìn)套管中，上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨數(shù)十次（6～8分鐘），充沛研碎，制成20%的勻漿液。
② 機(jī)器勻漿：用安排搗碎機(jī)10000～15000 轉(zhuǎn)/分 上下研磨制成20%安排勻漿，也可用內(nèi)切式安排勻漿機(jī)制備（勻漿時(shí)刻10秒/次，間隙30秒，接連3～5次，在冰水中進(jìn)行,可適當(dāng)延伸勻漿時(shí)刻），
4、將制備好的20%勻漿液用一般離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)4000轉(zhuǎn)/分左右,離心10～15分鐘，取上清液進(jìn)行測(cè)定.
三、樣本保存:
植物安排樣本暫時(shí)不測(cè)定，可立即低溫凍存，溫度越低越好，中心如不重復(fù)凍融，-20℃以下可保存三個(gè)月,-70℃以下可保存六個(gè)月。 制備好的勻漿液建議不要凍存,當(dāng)天進(jìn)行測(cè)定,如放置時(shí)刻過(guò)長(zhǎng)相關(guān)酶活會(huì)有所下降,部分目標(biāo)4℃可寄存3～5天(如SOD要寄存2～3天,MDA可寄存3～5,總蛋白測(cè)定可存5～7天。