斑馬魚酰基輔酶A（Acyl-Coa）酶聯(lián)免疫分析

發(fā)布時(shí)間： 2019/4/25　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1207次

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斑馬魚酰基輔酶A（Acyl-Coa）酶聯(lián)免疫分析試劑盒運(yùn)用說(shuō)明書
本試劑盒僅供研究運(yùn)用。
檢測(cè)規(guī)模： 96T 12 U/L -550 U/L

運(yùn)用意圖：本試劑盒用于測(cè)定斑馬魚血清、血漿及相關(guān)液體樣本中酰基輔酶A（Acyl-Coa）活性。
斑馬魚酰基輔酶A（Acyl-Coa）酶聯(lián)免疫分析試劑盒試驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中斑馬魚酰基輔酶A（Acyl-Coa）水平。用純化的斑馬魚酰基輔酶A（Acyl-Coa）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中順次參加酰基輔酶A（Acyl-Coa），再與HRP標(biāo)記的酰基輔酶A（Acyl-Coa）抗體結(jié)合，構(gòu)成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗刷后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終究的。顏色的深淺和樣品中的酰基輔酶A（Acyl-Coa）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），經(jīng)過(guò)規(guī)范曲線核算樣品中斑馬魚酰基輔酶A（Acyl-Coa）活性濃度。

試劑盒組成

標(biāo)本要求
1．標(biāo)本收集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行試驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3按捺辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
斑馬魚酰基輔酶A（Acyl-Coa）酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、規(guī)范孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上規(guī)范品加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品終究稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，悄悄晃動(dòng)混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗刷液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗刷：當(dāng)心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗刷液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.加酶：每孔參加酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗刷：操作同5。
9.顯色：每孔先參加顯色劑A50μl，再參加顯色劑B50μl，悄悄震動(dòng)混勻，37℃避光顯色10分鐘.
10.停止：每孔加停止液50μl，停止反響（此刻藍(lán)色立轉(zhuǎn)）。
11.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加停止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
斑馬魚酰基輔酶A（Acyl-Coa）酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作程序總結(jié)：

核算
以規(guī)范物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出規(guī)范曲線，根據(jù)樣品的OD值由規(guī)范曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用規(guī)范物的濃度與OD值核算出規(guī)范曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，核算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)踐濃度。
注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可運(yùn)用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗刷液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗刷時(shí)不影響成果。
3．各步加樣均應(yīng)運(yùn)用加樣器，并常常校正其性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，引薦運(yùn)用排槍加樣。
4．請(qǐng)每次測(cè)定的一起做規(guī)范曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于規(guī)范品孔第yi孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，核算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性運(yùn)用，以避免交叉污染。
6．底物請(qǐng)避光保存。
7．嚴(yán)格依照說(shuō)明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)成果判定有必要以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗刷液和各種廢棄物都應(yīng)按感染物處理。
9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

保存條件及有效期
1．試劑盒保存：2-8℃。
2．有效期：6個(gè)月

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